Microscopie à 2 photons

La microscopie à 2 photons est une technique de microscopie à fluorescence qui utilise deux photons pour exciter une molécule spécifique dans un échantillon. Cette technique, développée dans les années 1970, permet d’obtenir des images de haute résolution à l’intérieur de l’échantillon, même lorsque celui-ci est épais ou opaques.

La technique repose sur la propriété de certains matériaux à pouvoir être excités par l’absorption simultanée de deux photons plutôt que d’un seul. Cette absorption de deux photons, aussi appelée fluorescence à 2 photon, est réalisé à l’aide d’un laser à haute cadeance (souvent femtoseconde) et haute énergie.

L’utilisation de deux photons permet d’éviter les effets de bord tels que le photobleaching et la phototoxicité qui peuvent être rencontrés dans les techniques de microscopie traditionnelles. Par ailleurs elle ne nécessite pas de marquage spécifique, ce qui la rend très utile pour l’imagerie de tissus vivants. Il est alors possible de réaliser des images haute résolution sans endommager les cellules. La technique de microscopie à 2 photons est également utilisée pour l’étude de la dynamique des cellules et de la biologie moléculaire.

Il existe différents types de microscopie à 2 photons tels que la microscopie à 2 photons par fluorescence et la microscopie à 2 photons par résonance Raman. Chacune de ces techniques utilise des lasers femtosecondes pour exciter l’échantillon et obtenir des images de différentes propriétés de l’échantillon.