Microscopie de Super Résolution

Les techniques de microscopie à super-résolution sont appelées ainsi en raison de leur capacité à résoudre des structures au-delà de la limite de diffraction de la lumière. Elles permettent ainsi de révéler plus d’informations sur les structures biologiques que ne peut faire la microscopie optique conventionnelle.

Il existe plusieurs types de techniques de microscopie à super-résolution, chacune ayant ses propres avantages et inconvénients.

1. Microscopie de Super Localisation

Elles comprennent les techniques de PALM (Photoactivated Localization Microscopy), de STORM (Stochastic Optical Resolution Microscopy) et de DNA-PAINT (DNA-based Point Accumulation for Imaging in Nanoscale Topography).

Ces techniques sont capables d’isoler temporairement des fluorophores uniques d’un groupe et de tirer parti de notre capacité à localiser ces fluorophores à des points limités par la diffraction. En localisant individuellement des fluorophores uniques et en les reconstruisant en une seule image, il est possible de générer une image super-résolue contournant efficacement la limite de diffraction.

2. SIM et iSIM

La microscopie à illumination structurée (SIM) et à grande vitesse (iSIM) peuvent diviser par deux la limite de résolution de la microscopie optique conventionnelle.

Cependant, contrairement aux autres méthodes de super-résolution, l’iSIM peut capturer des images jusqu’à 100 Hz et sur des plans focaux plus fins. Cela permet de générer des images 3D super-résolues dans le temps en profondeur dans les structures biologiques, tout en utilisant des colorants et des molécules fluorescentes conventionnelles.

3. SOFI (Super-resolution Optical Fluctuation Imaging)

Elle offre une imagerie à super-résolution à grande vitesse et à faible coût d’échantillons grâce à l’analyse informatique des fluorophores fluctuants.

La technique SOFI exploite la corrélation de la lumière provenant de fluorophores individuels : plus il y a de lumière, plus la lumière qui frappe un pixel est corrélée, plus ce pixel sera brillant dans l’image SOFI. En corrélant les fluorophores dans le temps et / ou dans l’espace, Il est possible de générer des images d’une très grande résolution.