Microscopie TIRF

La microscopie TIRF (Total Intern Reflection Fluorescence) ou microscopie à onde évanescente est une technique clé en imagerie de cellules vivantes.

Lorsqu’un faisceau laser passe d’un milieu d’indice n1 à un milieu d’indice n2, il existe un angle incident critique à partir duquel le faisceau est totalement réfléchi. Se crée alors une onde évanescente dont l’intensité décroit exponentiellement avec la distance.

Cet angle critique est obtenu grâce à des optiques spécifiques à grande ouverture numérique. L’onde évanescente créée permet alors de sonder seulement quelques dizaines de nanomètres à l’interface de la lame, réduisant massivement l’impact de la lumière se propageant hors plan focal, et améliorant la capacité de détection des molécules fluorescentes.

La microscopie TIRF est généralement une technique à très faible luminosité. L’un des principaux défis est de collecter autant de photons émis que possible pour maximiser le rapport signal sur bruit, de sorte qu’une caméra très sensible est souhaitée.